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ELISA實驗是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發生的高選擇性高特異性識別和結合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數據處理。
ELISA實驗中的洗板步驟是確保實驗結果準確的關鍵環節，涉及多個關鍵點：
1. 洗滌參數：
- 洗滌量：自動洗板機通常建議使用350µl的洗滌液來確保清洗整個反應孔的壁。洗滌量應比包被體積稍高，以減少未結合抗體的背景信號。
- 均勻性：所有反應孔的洗滌量必須一致，確保每次洗滌都達到相同的效果。
2. 洗滌次數：
- 一般建議：在每次抗體或抗原孵育后重復洗滌3次。對于用戶包被的ELISA板，可能需要優化洗滌次數，因為包被平板通常需要的洗滌次數較少。
- 平衡背景與信號：過多的洗滌會降低信號強度，而過少則會導致背景值升高。因此，需要找到一個平衡點。
3. 洗板方法：
- 自動洗板機：使用洗板機可以減少人為因素，提高速度和一致性，但需確保洗板機設置正確，包括洗滌量和次數。
- 手工洗板：手工洗板時，要注意洗液不要溢出孔外，加洗液后靜置1分鐘，然后大力拍干，確保孔內無殘留液。
4. 洗液：
- 配置：使用新鮮的、高質量的超純水或雙蒸水配制洗液，避免使用受污染的水。
- 稀釋倍數：按照試劑盒說明書稀釋，過高或過低的稀釋倍數都可能影響洗滌效果。
5. 注意事項：
- 避免污染：每次加樣和洗滌后，應更換封板膜，防止交叉污染。
- 拍板技巧：手工洗板時，拍板要用力但避免過度，以確保孔內無殘留液，同時防止樣本干涸。
- 重復性：確保每次操作的加樣量、時間和條件一致，以提高實驗的重復性。
6. 溫度控制：
- 溫育：溫育溫度通常為37℃，應嚴格控制，避免溫度波動影響反應。
- 避免邊緣效應：使用水浴或加熱板使整個板達到均勻溫度，減少邊緣孔與中心孔的溫差。
7. 顯色與終止：
- 顯色時間：根據試劑盒說明控制顯色時間，避免過長導致背景增高或過短導致結果偏低。
- 終止液：加入終止液時要確保無氣泡，終止反應后立即讀數。
8. 問題排查：
- 背景高：可能是洗滌不徹di或洗滌次數不足。
- 白板：可能是忘記加酶或顯色液，或試劑污染。
- 重復性差：檢查加樣量、操作時間和條件是否一致，以及樣本和試劑的穩定性。
遵循這些關鍵點和注意事項，可以有效提高ELISA實驗的準確性和重復性，確保實驗結果的可靠性。
